southern杂交指的是什么? 琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品基本原理是什么?

来源:今日热点 | 2023-06-25 14:05:52 |

southern杂交指的是什么?

Southern印迹杂交(Southern blot)是1975年由英国人southern创建,是研究DNA图谱的基本技术,在遗传病诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。由于核酸分子的高度特异及检测方法的灵敏,综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果,便可绘制出DNA分子的限制图谱。但为了进一步构建出DNA分子的遗传图,或进行目的基因序列的测定以满足基因克隆的特殊要求,还必须掌握DNA分子中基因编码区的大小和位置。有关这类数据资料可应用Southern印迹杂交技术获得。

琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品基本原理是什么?

Southern印迹杂交是先将DNA样品(含不同大小的DNA片段)先按片段长短进行分离,然后进行杂交。这样可确定杂交靶分子的大小。因此,制备DNA样品后需要进行电泳分离。在恒定电压下,将DNA样品放在0.8~1.0%琼脂糖凝胶中进行电泳,标准的琼脂糖凝胶电泳可分辨70-80000bp的DNA片段,故可对DNA片段进行分离。但需要用不同的胶浓度来分辨这个范围内的不同的DNA片段。原则是分辨大片段的DNA需要用浓度较低的胶,分辨小片段的DNA则需要浓度较高的胶。经过一段时间电泳后,DNA按分子量大小在凝胶中形成许多条带,大小相同的分子处于同一条带位置。另外为了便于测定待测DNA分子量的大小或是所处的分子大小范围,往往同时在样品邻的泳道中加入已知分子量的DNA样品即标准分子量DNA (DNA marker)进行电泳。DNA marker可以用放射核素进行末端标记,通过这种方式,杂交后的标准分子量DNA也能显影出条带。


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